磁珠偶联抗原

活化

移取 0.5mL (10mg) 的 BioMagPlus 羧基磁珠至 15mL 尖头离心管内,并放置在磁分离架上直到上清液变完全透彻后,用吸管小心移弃上清。
加 5mL of MES 缓冲液充分混匀洗涤. 将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复 Step 2, 三次. 最后一次洗涤后, 重悬磁珠于 5mL 的 MES 缓冲液中。
活化试剂(),剧烈振荡摇匀。
室温下,将离心管置于旋转混匀仪上活化反应 30 分钟。反应过程中,注意不让磁珠沉淀聚积在一起。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复 Step 2, 四次。

蛋白偶联
计算需要偶联的蛋白,抗体量. 一般地,每mg活化的羧基磁珠可以偶联20-500ug的蛋白(抗体)。可适量添加一些载体蛋白,如BSA Fraction V,增加反应体系中的总蛋白量,从而可以起到一定的封闭作用。保证抗体偶联的正确方向。
将蛋白加至 5mL MES 缓冲液中。
(吸取 50μL 蛋白液于950μL的MES缓冲中. 配成1:20的稀释液. 标记为偶联反应前蛋白液.置于一旁用于后面的偶联率计算。)
将剩下的蛋白液加到装有活化磁珠的离心管内,剧烈振荡混匀,室温下,将离心管置于旋转混匀仪上偶联反应16-24小时。
(将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心收集上清. 标记为偶联后蛋白液,用于计算偶联率。)
重悬磁珠于 5mL MES 缓冲液中,振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。
重复 Step 6, 一次
加 5mL 的淬灭液,振荡摇匀,室温下,将离心管置于旋转混匀仪上 30 分钟。
将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。

洗涤和贮存偶联后的磁珠
加 5mL 洗涤缓冲液并剧烈振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。
重复 Step 1, 三次。
最后一次洗涤后, 重悬磁珠于 2mL 洗涤缓冲液内,此时磁珠的浓度约为5 mg/mL.
置于 2-8摄氏度保存。
0.05M MES配方 :2-(N-吗啉代)乙磺酸,用超纯水配制即可

来源:网络

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