抗体偶联羧基微球后抗体活性低

问:我们曾经试图将抗体连接到1μm羧酸化微粒表面,但发现所得微粒上的抗体活性非常低。请问有什么地方我们做错了吗?

答:每一个步骤都有可改进的空间,但对于表面连接问题,您可特别关注以下方面,看是否是其中一处出现了差错。最常见的问题通常涉及:微粒预清洗、试剂(EDAC)的质量、或蛋白质用量。

在使用微粒时,首先必须进行清洁处理,以去除表面活性剂及任何其他由合成过程产生的残留物,因为这些物质可能会干扰表面连接操作。尤其是界面活性剂,它会连接在微粒表面,从而阻碍配体与微粒的连接。通常,我们建议进行三遍预清洗,例如头两遍在不含添加剂的清洁缓冲液(例如PBS)中,最后一遍在活化/偶联缓冲液(例如MES)中。

在使用前,必须肉眼观察一下EDAC试剂。EDAC的吸湿性极强,若其中存在永久性团块,则说明其中含水,这样就可能使抗体的活性降低。若一瓶EDAC已经使用了较长时间,或者所用的配体非常稀少或昂贵,那么您可考虑换一瓶新的,以确保能够顺利实现表面连接。EDAC非常便宜,只要简单地换用一瓶新的,就可为您节省宝贵的时间以及节约抗体。为方便使用,我公司所出售的EDAC及其他配套试剂通常是一次用量的(产品目录编号BLI5288, DEPC-Carbodiimide[EDAC]; 请参见技术数据表#911《Accessory Reagents》)

低活性也可能是抗体量太少所导致的,通过提高蛋白质浓度也可改善最终所得颗粒的抗体活性。若您不确定合适的用量,那么就请先按照我公司的PolyLink 蛋白质偶联试剂盒(产品目录编号24350, TDS#644)中所述的方法步骤来操作,然后再进行优化。

当然,也有可能是由一些常见原因导致的, 您可检查一下缓冲液的组成/pH 范围、培养时间、混合步骤等。

以上问题和答案来自Polysciences公司。

抗体偶联羧基微球后抗体活性低

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